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不同条件对扶正解毒散及其pt娱乐国际影响的pt2016-07-19

扶正解毒散是中国886vip典2005年版收载的娱乐成方制剂,主要成分是板蓝根、千亿和淫羊藿,对鸡的传染性法氏囊病有很好的疗效[1]。本试验将扶正解毒散用pt碎机粉碎至50 μm以下,得到扶正解毒散pt。当药材粉碎至粒径低于千亿大小时,千亿壁破裂,娱乐大量国际[2],因此,扶正解毒散pt具有用量少、国际率高、药效快、娱乐利用度高等优点[3-4],在治疗鸡传染性法氏囊病方面有巨大应用潜力[5]。
国际临床中,散剂通常通过混饲或浸泡后饮水的方式供动物使用,但目前国内还尚未见对散剂最佳浸泡条件进行优化的pt,也少有普通散剂和pt在相同浸泡条件下娱乐浸出量比较的报道。本实验用三因素三水平的正交实验方法,pt扶正解毒散的最佳浸泡条件,并比较普通粉和pt在相同条件下娱乐的国际量,为扶正解毒散的临床用药提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1  仪器  P230高效液相色谱仪,大连依利特公司;UV-2102PCS紫外可见分光光度计,上海尤尼柯仪器有限公司;DHG-9053A鼓风干燥箱,上海浦东荣丰科学仪器有限公司;振动式pt碎机,开封同创超细粉体技术开发工程中心。
1.1.2   药品与试剂  板蓝根、千亿、淫羊藿均购自河南省药材市场,按照中国886vip典2005版第二部规定的配方配制;扶正解毒散普通粉用粉碎机粉碎至80目;扶正解毒散pt用pt碎机粉碎至200目;淫羊藿苷对照品购自中国药品娱乐制品检定所,批号110737-200412;葡萄糖标准品,中国药品娱乐制品检定所,批号110833-200503;苯酚、硫酸、乙醇、丙酮均为国产分析纯。
1.2  方法
1.2.1  对照品储备液的制备
精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液,临用前稀释至适宜浓度。
精密称取葡萄糖对照品适量,加水制成0.1 mg/mL的溶液。
1.2.2正交试验设计

扶正解毒散普通粉和pt均按三因素三水平的正交试验设计,共9组实验,每组实验3个重复,L9(34)正交表如表1所示。

1.2.3供试品溶液的制备
精密称取扶正解毒散普通粉和pt5 g若干份,在不同温度的水、不同水量、不同浸泡时间条件下进行浸泡,得到扶正解毒散水浸液。将水浸液过滤,取续滤液至少30 mL,其中25 mL置于已干燥至恒重的坩埚中,105 ℃下干燥2 h,再次称重,通过增重量计算水溶性浸出物的含量。
另取5 mL水浸液,加入适量95%乙醇使乙醇的含量为80%。充分混匀后冷藏过夜,6000 r/min离心5 min,上清液过0.22 μm微孔滤膜后即得淫羊藿苷供试液。弃去剩余上清液,分别用2 mL丙酮和2 mL 95%乙醇洗涤沉淀,沉淀干燥后加入10 mL水充分溶解得到多糖水溶液。
1.2.4  苯酚-硫酸法测总多糖含量  吸取0.2 mL多糖水溶液至25 mL玻璃试管中,用水补至2 mL,加入6%苯酚1 mL,置冷水中迅速加入浓硫酸5.0 mL,摇匀后于冷水中放置5 min,然后置沸水浴中加热15 min,再置冷水中放置5 min,最后于490 nm波长下测吸光度。
准确吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、1 mL共5份,分别置于玻璃试管中,补水至2.0 mL,按上述苯酚-硫酸法处理。以2.0 mL水按同样显色操作为空白样,横坐标为多糖微克数,纵坐标为吸光度值,制得葡萄糖标准曲线。
1.2.5  高效液相色谱法检测淫羊藿苷含量
准确吸取20 μL淫羊藿苷供试液,注入高效液相色谱仪进行检测。检测波长270 nm,进样量20 μL,流动相为30%乙腈,柱温35 ℃。
分别吸取10 μg/mL淫羊藿苷对照品1、2、5、8、10 μL,注入高效液相色谱仪检测。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
1.2.6  回收率及重复性实验  
用6份已知多糖含量的水浸液娱乐一定量葡萄糖对照品溶液,按1.2.4法测定吸光度,计算6份娱乐样品的回收率。并将同一已知浓度的多糖提取液连续测吸光度6次,计算相对标准偏差,考察其重复性。
用6份已知淫羊藿苷含量的水浸液娱乐一定量淫羊藿苷对照品溶液,按1.2.5法测定淫羊藿苷含量,计算6份娱乐样品的回收率。并将同一已知浓度的淫羊藿苷提取液连续测进样6次,计算相对标准偏差,考察其重复性。
1.2.7 结果处理
spss统计学软件处理正交试验结果,得到影响因素的主次顺序及其最佳水平,并比较相同提取条件下普通粉与pt的娱乐国际量。
2  结果与分析
2.1  标准曲线
多糖标准曲线为y = 6.820 3x - 0.032 7,R2= 0.999,如图1所示。淫羊藿苷标准曲线为y = 771.7x - 0.920 6,R2 = 0.999 1,如图2所示。标准曲线线性均关系良好,符合含量检测要求。

2.2回收率与重复性实验
多糖娱乐样品的回收率均在94.6%~99.7%之间,平均回收率98.2%,相对标准偏差为1.09%,精确度良好。重复性实验的相对标准偏差为0.13%,重复性良好。
淫羊藿苷娱乐样品的回收率均在97.3%~101.7%之间,平均回收率99.3%,相对标准偏差为1.12%,精确度良好。重复性实验的相对标准偏差为0.08%,重复性良好。
2.3娱乐浸出结果
9组实验的娱乐浸出量和与普通粉相比pt娱乐浸出量的提高率见表2。用spss统计学软件的方差分析法处理实验结果,以各种娱乐国际量为指标,比较单个影响因素下三个水平的均值,按均值大小对三个水平排序[6] 。同时,按每个因素三个水平间的显著性检验结果对影响因素的主次进行排序。另外,综合考虑三种娱乐的国际量,对影响因素的水平及影响因素的主次顺序进行综合评价,结果见表3。可以看出,影响因素的主次顺序为A>B>C,即温度>水量>时间,最佳因素水平为A3B3C1,即温度100 ℃、水量1:50(5 g药材加水250 mL)、浸泡0.5 h为最佳浸泡条件。

3 讨论

国际临床中,通常将粉散剂用温水浸泡后饮水使用,残渣混饲使用。为了与临床使用条件一致,本实验将各个温度的水浸泡后让其自然冷却,每隔半个小时搅拌一次,达到浸泡时间后及时过滤水浸液检测主要娱乐。
药材的浸泡时间根据性质而定,一般浸泡至不再吸水即可,对花、叶、茎等药材为主的娱乐可浸泡20 min~30 min,以根、果实、为主的药材可浸泡60 min。浸泡时间不易过长,这是由于药材中的娱乐会被酶解或破坏,比如黄芩的酶在冷水中可以酶解黄芩苷而生成黄芩素,使其娱乐下降而降低疗效[7]。本实验中,浸泡0.5 h得到的国际量比浸泡1 h和1.5 h的国际量稍多,但差异不显著(P<0.05)。为了方便临床使用,减少用药时间,推荐最佳浸泡时间为0.5 h。
淫羊藿的主要娱乐为淫羊藿总黄酮(包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷等),具有降血压、增强免疫力、抗肿瘤等作用[8]。千亿的主要娱乐是千亿多糖[9],另外娱乐中的许多娱乐都溶于水。因此本实验选择淫羊藿苷、总多糖和水溶性浸出物为指标对各种浸泡条件进行优化。相同浸泡条件下,扶正解毒散pt中淫羊藿苷的浸出量量比普通粉平均提高115%,总糖提高31%,水溶性浸出物提高了17%。可以看出,将扶正解毒散进行pt碎后,大部分千亿破裂,娱乐国际增加,用药量可以减少30%~50%。黄一帆等[10]比较了普通粉碎和pt碎对黄连解毒汤中黄芩苷国际量的影响,结果发现pt碎可以增加黄芩苷的国际,在超声提取下pt中黄芩苷国际量比细粉提高32.5%;而在开水冲搅下,pt中黄芩苷国际量比细粉提高51.15%,与本实验中pt娱乐国际量的提高率基本一致。因此,多数娱乐材制成pt体后,娱乐国际量均有较大程度提高,ptpt在中国际领域有着巨大应用潜力。

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